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微升/納升級液相色譜

Micro/Nano-HPLC



微升/納升級高效液相色譜(Micro/Nano-HPLC)在現(xiàn)代實(shí)驗室擴(kuò)展傳統(tǒng)高效液相色譜(HPLC)應(yīng)用范圍中扮演至關(guān)重要的角色。今天，Micro/Nano-HPLC或多或少在生物技術(shù)至環(huán)境分析廣泛應(yīng)用領(lǐng)域中已作為常規(guī)應(yīng)用。例如，capLC-ESI-MS多肽譜圖分析或血漿中重要的微量代謝物的分析。

  

Micro/Nano-HPLC相對于傳統(tǒng)HPLC的特色和優(yōu)勢：

極高靈敏度
Micro/Nano-HPLC柱提供超高靈敏度是由于它的低擴(kuò)散性。當(dāng)進(jìn)同樣量的樣品時，75 μm ID柱子在靈敏度上要比4.6 mm ID柱增加3760倍。分析物較小的峰體積，導(dǎo)致濃度靈敏檢測器(紫外、熒光、電噴霧質(zhì)譜)產(chǎn)生較高的響應(yīng)。這種靈敏度的增加，對樣品量有限的應(yīng)用中準(zhǔn)確定量經(jīng)常是必須的。
再現(xiàn)性
Micro/Nano-HPLC色譜柱的選擇性和柱效在使用新柱子替換用過的柱子時應(yīng)保持一致。Micro/Nano-HPLC的一個突出優(yōu)點(diǎn)就是可以用同一批填料能填裝幾千根柱子，消除了填料不同批次變化產(chǎn)生的問題。
檢測限改善
當(dāng)分析的樣品量非常有限時，Micro/Nano-HPLC柱在連接含量敏感檢測器(如ESI-MS)或應(yīng)用柱后分離時提供了較低的檢測限(LOD)。例如，0.5 mm ID的柱子檢測限比4.6 mm ID柱子低85倍。在許多應(yīng)用中，在樣品量太少以至于根本無法用傳統(tǒng)HPLC檢測的情況下，必須使用Micro/Nano-HPLC。
減少廢液
Micro/Nano-HPLC柱與傳統(tǒng)規(guī)格的HPLC柱相比，有機(jī)溶劑的消耗大量減少。例如，1.0 mm ID柱子與傳統(tǒng)4.6 mm ID柱子比較，流動相消耗減少21倍。
高溫兼容性
Micro/Nano-HPLC的快速熱傳導(dǎo)對利用溫度調(diào)節(jié)色譜能力是理想的。例如，使加熱流動相簡單化或根本不需要。高柱溫增加質(zhì)量擴(kuò)散速度，因而改善柱效。一般來說，峰尖銳柱效得到改善。高溫通常減小保留并因此不需要有機(jī)修飾劑，并經(jīng)常在不失去柱效的情況下以較高流速執(zhí)行分析。
液質(zhì)聯(lián)用時是最佳的
由于質(zhì)譜儀要求被測的樣品氣化和離子化，如果色譜儀流速太大，氣化和離子化將非常困難。而加熱又對樣品特性有所改變。Micro/Nano-HPLC色譜柱正好解決了這個問題。再加上Micro/Nano-HPLC色譜柱的高敏感性和高分辨率，體積又小，容易安裝和連結(jié)，特別是毛細(xì)管柱子又有一定的柔韌性，因此，Micro/Nano-HPLC色譜拄用作液質(zhì)聯(lián)用是最佳的。另外，由于Micro/Nano-HPLC色譜柱的低流速，樣品濃縮度高，用作離線樣品收集和MALDI點(diǎn)樣，然后再作質(zhì)譜也是最佳的，而且會達(dá)到更高的樣品檢測覆蓋率。
穩(wěn)定性
盡管Micro/Nano-HPLC色譜柱在穩(wěn)定性方面目前還不能與傳統(tǒng)HPLC相媲美，但在許多次進(jìn)樣后仍然可以確保柱子性能的可靠，其選擇性和柱效也是持續(xù)穩(wěn)定的。只有在Micro/Nano-HPLC色譜柱在超過一定周期的使用后，仍保持其物理和化學(xué)穩(wěn)定和色譜性能，它才能被日常常規(guī)分析方法所接受。通過適當(dāng)?shù)臉悠分苽洳⑹褂妙A(yù)柱/柱切換，Micro/Nano-HPLC色譜柱可以接受幾百次的進(jìn)樣。
減小柱長，快速分離
許多分離是在不犧牲基本柱效情況下可以使用較短柱子和較高流速。而且，在使用高選擇檢測器(如質(zhì)譜儀)時，經(jīng)常不需要基本柱效。但是，因為在離子源中存在可能的抑制效應(yīng)，尤其是在分析復(fù)雜物質(zhì)(如生物樣品)時，從空體積/基質(zhì)填充物中能夠執(zhí)行分析物質(zhì)的分離應(yīng)是首選的。